JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologia
0 wyświetleń • 2:45 min • July 8th, 2025
Mysie oko jest pokryte trzema warstwami: najbardziej zewnętrzną włóknistą twardówką, środkową powłoką naczyniówkową i najbardziej wewnętrzną siatkówką. Jama w kształcie miseczki między siatkówką a soczewką oka zawiera ciało szkliste – galaretowate medium, które pomaga przepuszczać światło do siatkówki. Z kolei siatkówka przekazuje powstałą informację wzrokową przez nerw wzrokowy do mózgu.
Aby wydobyć miseczkę siatkówki, weź uśpioną mysz i wyłuszczej jej oko. Zanurz oko na szalce Petriego zawierającej odpowiedni lodowaty bufor, aby zapobiec degradacji tkanek. Umieścić szalkę Petriego pod mikroskopem preparacyjnym.
Odetnij resztki nerwu wzrokowego od podstawy gałki ocznej. Wykonaj małe nacięcie na styku siatkówki i rogówki - przezroczystą powłokę wokół soczewki oka. Korzystając z tego otworu, wykonaj pełne okrągłe nacięcie wzdłuż połączenia siatkówka-rogówka, aby odłączyć soczewkę i żel do ciała szklistego od oka.
Usuń soczewkę i ciało szkliste, aby uzyskać półokrągłą muszlę oczną zawierającą siatkówkę wyściełaną naczyniówką i twardówką. Utwórz wiele powierzchownych nacięć w całej twardówkowej części muszli ocznej. Użyj tych nacięć, aby oddzielić zewnętrzne warstwy oczu w celu uzyskania nienaruszonej miseczki siatkówki do dalszych zastosowań.
Wyłuszczenie oczu dorosłej myszy poddanej eutanazji i umieszczenie ich w lodowatym PBS na szalce Petriego, a następnie umieszczenie szalki Petriego pod mikroskopem preparacyjnym. Za pomocą mikronożyczek odetnij nerw wzrokowy, a następnie ostrożnie usuń dodatkowe mięśnie proste przyczepione na zewnątrz gałki ocznej.
Za pomocą igły o rozmiarze 30 przebij otwór na krawędzi rogówki. Następnie użyj drobnych mikronożyczek do preparowania, aby wykonać okrągłe cięcie wzdłuż krawędzi rogówki. Za pomocą ostrych kleszczy preparacyjnych usuń rogówkę, soczewkę i ciało szkliste z muszli ocznej. Wykonaj kilka małych nacięć na warstwie twardówki na krawędzi muszli ocznej za pomocą drobnych mikronożyczek do preparowania. Użyj dwóch ostrych kleszczy preparacyjnych, aby przytrzymać tkankę twardówki z każdej strony i bardzo ostrożnie pociągnij za warstwę twardówki, aby usunąć ją z siatkówki nerwowej. Powtarzaj to wokół muszli ocznej, aż cała twardówka zostanie usunięta i uzyskasz nienaruszoną miseczkę siatkówki.