JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 4:19 min. • July 8th, 2025
Na początek zabezpiecz uśpioną mysz w pozycji leżącej. Naciąć bocznie ścianę klatki piersiowej, aby uzyskać dostęp do jamy klatki piersiowej i odsłonić serce. Wytnij prawy przedsionek i wstrzyknij sól fizjologiczną do lewej komory, aby odprowadzić krew z serca.
Przeciąć połączenia naczyniowe, odcinając główne naczynia krwionośne. Ponadto naciąć tętnicę płucną w odpowiedniej odległości od połączenia komorowo-tętniczego, które służy jako kanał do zwiększania ciśnienia. Usuń komory, aby wystawić stronę komorową na ciśnienie atmosferyczne.
Teraz przymocuj rurkę ciśnieniową do tętnicy płucnej, zapewniając odpowiedni odstęp między połączeniem komorowo-tętniczym a końcem rurki, aby umożliwić ruch płatków zastawki podczas zwiększania ciśnienia.
Do rurki podłączyć zbiornik wypełniony solą fizjologiczną zamocowany na wysokości obliczonej w stosunku do zastawki płucnej w oparciu o żądane ciśnienie hydrostatyczne, które ma być przyłożone do tętniczej strony zastawki. Jednokierunkowy przepływ od strony tętniczej przy przyłożonym ciśnieniu hydrostatycznym powoduje zamknięcie płatków zastawki i rozdęcie pnia płucnego.
Następnie wprowadzić odpowiedni utrwalacz do zbiornika i kontynuować perfuzję. Perfundowany utrwalacz stabilizuje morfologię komórkową i architekturę tkanek.
Umieść gazę nasączoną utrwalaczem na tkance, aby przymocować tkankę otaczającą zastawkę i zapobiec wysuszeniu. Przechowuj stałą zastawkę serca w utrwalaczu do czasu użycia.
Zacznij od autoklawowania narzędzi potrzebnych do sekcji myszy, w tym cienkich nożyczek, mikrokleszczy, zacisków mikronaczyniowych, kleszczy zaciskowych, uchwytów do mikroigieł, nożyczek sprężynowych i retraktorów.
Po eutanazji dorosłej myszy C57 Black 6 umieść ją w pozycji grzbietowej leżącej na tacy, zabezpiecz jej kończyny taśmą i wykonaj torakotomię. Odsłoń serce, usuwając nadmiar tkanki tłuszczowej i powięzi, a następnie usuń prawy przedsionek i przelej lewą komorę roztworem soli fizjologicznej o temperaturze pokojowej.
Usuń całe serce, przecinając żyłę główną górną, żyłę główną dolną, tętnicę płucną i aortę, a następnie przetnij około 2 milimetry powyżej połączenia komorowo-tętniczego, które będzie służyć jako kanał do zwiększania ciśnienia.
Usuń lewą i prawą komorę, aby wystawić komory na ciśnienie atmosferyczne, upewniając się, że struktura pnia płucnego nie została naruszona przez usunięcie komór. Rurka do pomiaru ciśnienia w zespoleniu z tętnicą płucną, pozostawiając około 1 milimetra odległości między połączeniem sinusoidalno-rurkowym a końcem rurki, aby dostosować się do dużych ruchów płatków i pnia płucnego.
Podnieś zbiornik do analogicznego ciśnienia fizjologicznego i napełnij go roztworem soli fizjologicznej. Przetestuj system przepływowy, aby upewnić się, że nie ma zatorów ani pęcherzyków powietrza. Podłączyć kran do zespolenia zastawki płucnej i zapewnić odpowiedni przepływ przez rurkę, przełączając drogę odpływową. Gdy przepływ jest wystarczający, przełączyć odpływ na zespolenie zastawki płucnej i zapewnić ciśnienie w pniu płucnym, identyfikowane przez rozdęcie tułowia.
Po potwierdzeniu ciśnienia w pniu płucnym, stopniowo wprowadzaj pierwotny roztwór utrwalający, aż 25% pojemności zbiornika roztworu soli zostanie usunięte. Umieść gazę nasączoną utrwalaczem na próbce tkanki, aby zapobiec wysuszeniu. Utrwalacz utrwalacz przez 3 godziny, ponownie napełniając zbiornik, aby utrzymać stałe ciśnienie.
Po perfuzji należy przechowywać zastawkę serca w roztworze utrwalającym w temperaturze 4 stopni Celsjusza do momentu użycia, przez okres do 1 tygodnia.