JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 3:21 min. • July 8th, 2025
Naczynia limfatyczne są obecne w skórze właściwej, a ich funkcją jest usuwanie nadmiaru płynu śródmiąższowego z tkanki. Uszkodzenie naczyń limfatycznych powoduje nadmierne gromadzenie się płynu w przestrzeni śródmiąższowej oraz wzrost podskórnego odkładania się tkanki włóknistej i tłuszczowej. Zmiany te skutkują obrzękiem limfatycznym.
Aby wytworzyć obrzęk limfatyczny w mysim ogonie, weź znieczuloną mysz i umieść ją w pozycji leżącej. Wykonaj wycięcie skóry na całym obwodzie w odpowiednio odległym miejscu, dystalnie do podstawy ogona. Naciąć inne miejsce na ogonie poniżej pierwszego cięcia.
Wykonaj pionowe nacięcie skóry łączące dwa wcześniej wykonane nacięcia. Za pomocą tego cięcia wytnij nakładający się plaster skóry, aby odsłonić żyły boczne i naczynia limfatyczne.
Weź strzykawkę zawierającą kolorowy barwnik śledzący i wstrzyknij go podskórnie w pobliżu końca ogona, sprawiając, że naczynia limfatyczne wydają się niebieskie. Przeciąć naczynia limfatyczne, owinąć miejsce rany i monitorować mysz przez żądany czas.
Mikrodysekcja zatrzymuje przepływ limfy w naczyniach, a płyn gromadzi się w przestrzeni tkankowej. W konsekwencji utrzymuje się obrzęk limfatyczny obserwuje się jako obrzęk grzbietu ogona myszy do miejsca operowanego.
Na początek ułóż 8-tygodniową uspokojoną mysz rufowo i przygotuj ogon 70% alkoholem izopropylowym. Użyj suwmiarki, aby zmierzyć średnicę ogona w odstępach co 5 milimetrów, zaczynając 20 milimetrów od podstawy ogona. Zaznacz 3-milimetrowe nacięcie obwodowe na ogonie 20 milimetrów od podstawy.
W chirurgicznym mikroskopowym powiększeniu wykonaj skrupulatne 3-milimetrowe wycięcie skóry o pełnej grubości, pozostawiając nienaruszone całe znajdujące się pod nią naczynia krwionośne. Naciąć górny znak obwodowy, najpierw przez skórę właściwą, a następnie obwodowe nacięcie o pełnej grubości 3 milimetry dystalnie do pierwszego nacięcia. Wykonaj prostopadłe pionowe nacięcie o pełnej grubości, aby połączyć dwa nacięcia, a następnie użyj drobnoziarnistego podbieracza, aby uchwycić krawędź natarcia i wyciąć głęboko w płaszczyźnie beznaczyniowej do skóry właściwej i powierzchownie do żyły przydankowej, za pomocą mikronożyczek.
Wstrzyknąć 0,1 mililitra 1% błękitu izosulfanowego podskórnie proksymalnie do końca ogona. Zidentyfikuj dwa kanały limfatyczne, które stają się niebieskie z powodu wstrzyknięcia, przylegające do bocznych żył ogonowych. Ostrożnie przeciąć limfę, wycinając płaszczyznę między żyłą boczną a limfatyczną prostymi nożyczkami mikrochirurgicznymi. Przełóż końcówkę jednego ostrza nożyczek między naczyniem limfatycznym a żyłą boczną i zamknij ostrza, aby przeciąć naczynie limfatyczne. Po zakończeniu opatruj ranę ogona sterylnym, przylegającym przezroczystym opatrunkiem.