JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologia
0 wyświetleń • 2:57 min • July 8th, 2025
Oko świni zawiera populację prostopadłościennych komórek nabłonkowych, które zawierają liczne melanosomy - organelle pomagające w absorpcji światła - co powoduje pigmentowany wygląd tych komórek. W zależności od lokalizacji tych komórek, komórki nabłonkowe obecne pod siatkówką nazywane są komórkami nabłonka barwnikowego siatkówki lub komórkami RPE, a te wyściełające tęczówkę są znane jako komórki nabłonka barwnikowego tęczówki lub komórki IPE.
Aby wyizolować komórki RPE i IPE, zacznij od pobrania oka świni. Zanurz oko w odpowiednim roztworze dezynfekującym, aby usunąć wszelkie drobnoustroje przyklejone do powierzchni oka.
Wyjmij oko z roztworu dezynfekującego i za pomocą igły wykonaj małe nacięcie w pobliżu tęczówki. Użyj tego otworu, aby wykonać pełne cięcie obwodowe wzdłuż granicy tęczówki. Powoduje to odłączenie przedniego odcinka oka zawierającego tęczówkę od tylnej opuszki oka, która ma siatkówkę. Usuń nadmiar porcji i przenieś tęczówkę i bańkę oka do oddzielnych naczyń hodowlanych.
Dodać odpowiednią pożywkę hodowlaną do płytki zawierającej tęczówkę i do bańki oka. Zeskrob chusteczkę. Siła mechaniczna rozluźnia komórki nabłonka, uwalniając je do pożywki. Odessać odłączone komórki IPE i RPE. Wysiewaj je na oddzielnych płytkach hodowlanych i inkubuj do dalszego użycia.
Oczyść pozostałą tkankę mięśniową i skórę z oczu, zdezynfekuj oczy w roztworze na bazie jodu i przepłucz je PBS.
Aby wyizolować komórki IPE, zdejmij soczewkę i wyciągnij tęczówkę, jak pokazano. Po przygotowaniu dwóch tęczówek dodaj 1 mililitr kompletnego podłoża i wyizoluj komórki, drapiąc płaską, wypolerowaną ogniowo pipetą Pasteura, a następnie policz i zasiej komórki. Umieścić płytkę w inkubatorze.
Aby wyizolować komórki RPE, usuń ciało szkliste i siatkówkę z tylnego segmentu i umieść bańkę na szalce Petriego. Napełnij żarówkę 1 mililitrem kompletnego podłoża. Za pomocą zakrzywionej, polerowanej ogniowo pipety Pasteura usuń komórki RPE, zbierz zawiesinę komórek w bańce za pomocą pipety o pojemności 1000 mikrolitrów i przenieś ją do 1,5-mililitrowej probówki w celu ponownego wymieszania. Następnie policz i zasiej komórki, a następnie inkubuj płytkę, jak pokazano wcześniej.