Izolacja komórek śródbłonka aorty świń (pAEC): oparta na enzymach metoda izolowania komórek śródbłonka z pobranej aorty brzusznej świni

Aorta - główna tętnica przenosząca natlenioną krew z serca do ciała - składa się z trzech warstw lub "tuniki": wewnętrznej błony wewnętrznej, środkowego środka i zewnętrznej przydanki. Komórki śródbłonka lub EC są obecne w błonie wewnętrznej jako cienka, ciągła monowarstwa na podtrzymującej błonie podstawnej składającej się z białek strukturalnych, głównie kolagenu.

Aby wyizolować EC, zacznij od pobranej aorty świńskiej w naczyniu hodowlanym. Wyciąć jego końce i otaczającą przylegającą tkankę, aby zapobiec zanieczyszczeniu komórek nieśródbłonkowych. Przemyj aortę buforem zawierającym antybiotyki hamujące rozwój drobnoustrojów.

Przeprowadź sterylny szew chirurgiczny przez aortę i zawiąż jeden z jej końców, utrzymując szew w świetle. Zabezpiecz zawiązany koniec i schuj szew, aby całkowicie odwrócić aortę. To naraża błonę wewnętrzną zawierającą EC na trawienie enzymatyczne. Potraktuj aortę wstępnie podgrzanym, nisko stężonym roztworem kolagenazy w celu uzyskania optymalnej aktywności enzymu i inkubuj.

Kolagenaza rozkłada białka kolagenowe obecne w błonie podstawnej leżącej pod EC, inicjując ich dysocjację. Po inkubacji dodać schłodzony bufor w celu dezaktywacji enzymów kolagenazy.

Del