Rozmrażanie zarodków królików: procedura rozgrzewająca w celu odzyskania kriokonserwowanych zarodków królików do transferu zarodków

Rozmrażanie zarodków to proces, w którym zamrożone zarodki w kriokonserwacji są podgrzewane i nawadniane, przywracając im aktywność biologiczną.

Aby rozmrozić kriokonserwowane zarodki królika w szczelnie zamkniętej słomce kriogenicznej, usuń słomkę z ciekłego azotu. Zarodki, przy minimalnej objętości pożywki zawierającej krioprotektanty, są fizycznie izolowane przez segmenty powietrza i pożywki w słomie. Na krótko umieść słomkę w powietrzu, ułatwiając uwalnianie uwięzionych oparów ciekłego azotu, które w przeciwnym razie powodują uszkodzenie zarodków podczas wystawienia na działanie wyższych temperatur.

Szybki wzrost temperatury kriogenicznego ciekłego azotu do wyższych temperatur zamarzania inicjuje tworzenie się kryształków lodu w słomie kriogenicznej, co grozi uszkodzeniem zarodka. Gdy zaczną tworzyć się kryształki lodu, natychmiast zanurz słomkę w łaźni wodnej o kontrolowanej temperaturze z delikatnym mieszaniem, aby zapewnić równomierne rozmrożenie. Ten etap usuwa kryształki lodu, chroniąc zarodki przed uszkodzeniem kryształków lodu.

Wyjmij korek słomki. Odetnij zapieczętowany koniec słomki; Podłącz mikrodozownik, aby uwolnić zawartość do płytki hodowlanej z pożywką zawierającą sacharozę. Pożywka pomaga usunąć krioprotektanty z zarodków; Sacharoza pozwala uniknąć nadmiernego obrzęku zarodków, przywracając im fizjologiczne środowisko podczas nawadniania.

Przenieś zarodki na świeżą płytkę zawierającą pożywkę, aby całkowicie usunąć krioprotektanty, zapewniając całkowite nawodnienie. Rozmrożone zarodki są gotowe do zabiegu transferu zarodków.

Aby rozmrozić zarodki do transferu, umieść ministraw poziomo, 10 centymetrów od pary ciekłego azotu na 20 do 30 sekund. Kiedy proces krystalizacji rozpocznie się wewnątrz ministrawa, zanurz słomkę w łaźni wodnej o temperaturze 25 stopni Celsjusza na 10 do 15 sekund. Natychmiast wyjąć słomkę i bawełniane zatyczki i za pomocą sprzężonego mikrodozownika wylać zawartość paszy do płytki zawierającej podłoże bazowe o temperaturze 25 stopni Celsjusza uzupełnione 0,33 molowym roztworem sacharozy, w którym zarodki muszą pozostać przez 5 minut. Następnie przenieś zarodki na płytkę ze świeżą pożywką bazową na kolejną 5-minutową inkubację.