JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 4:21 min. • July 8th, 2025
Integraza phiC31 jest enzymem rekombinazy pochodzącym z fagów, który katalizuje specyficzną dla miejsca rekombinację transgenu, obcego genu, do genomu gospodarza. W celu integracji transgenu z gospodarzem Anopheles, należy rozpocząć od zarodka Anopheles w odpowiednim buforze.
Genom Anopheles jest wstępnie zaprojektowany z miejscem przyczepu do integracji genów i cyjanowo-fluorescencyjnym markerem do selekcji wizualnej. Następnie dodaj niewielką objętość plazmidu dawcy przenoszącego pożądany ładunek transgenu, miejsce przyczepu, czerwony marker fluorescencyjny i składniki szkieletu plazmidu do fiolki. Następnie dodaj optymalną objętość plazmidu pomocniczego przenoszącego integrazę kodującą gen. Teraz załaduj mieszaninę plazmidu do mikrostrzykawki.
Delikatnie wstrzyknij plazmidy w tylny biegun zarodka, miejsce pochodzenia komórek rozrodczych, powodując niewielki ruch cytoplazmy. Po wejściu do zarodka plazmid pomocniczy zaczyna syntetyzować enzymy integrazy.
Enzym integrazy pośredniczy w specyficznej dla miejsca rekombinacji między plazmidem dawcy a genomem gospodarza. W ten sposób transgen i czerwony marker fluorescencyjny z plazmidu dawcy integrują się w rekombinowanych miejscach pr
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych