JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 3:26 min. • July 8th, 2025
Jednojądrzaste komórki krwi obwodowej lub PBMC to krwinki krążące z pojedynczymi, dużymi jądrami, składającymi się z limfocytów B i T, komórek NK, monocytów i komórek dendrytycznych. PBMC przechowują nadwyżkę glukozy w postaci polimerowej w postaci glikogenu - rozgałęzionego polisacharydu - w swojej cytoplazmie.
Aby wykryć obecność glikogenu w PBMC, należy przygotować jednolity rozmaz wyizolowanych PBMC na szkiełku podstawowym. Potraktuj komórki formaliną - roztworem utrwalającym, który sieciuje biomolekuły komórkowe, zachowując integralność strukturalną PBMC.
Częściowo zanurz szkiełko w roztworze amylazy. Enzym ten wnika do komórek i hydrolizuje glikogen w leczonych komórkach. W ten sposób powstają dwie odrębne populacje komórek - komórki bogate w glikogen leczone enzymami i nieleczone amylazą, bogate w glikogen
.Załóż je roztworem kwasu periodycznego, który oksydacyjnie przekształca grupy hydroksylowe cząsteczek glikogenu w aldehydy.
Opłucz szkiełko w wodzie, aby zatrzymać reakcję utleniania i usunąć nadmiar kwasu okresowego. Potraktuj szkiełko odczynnikiem Schiffa, który reaguje z grupami aldehydowymi glikogenu traktowanego kwasem okresowym, tworząc nierozpuszczalny kompleks o b
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych