Barwienie srebrem siarczanowanych glikozaminoglikanów: metoda barwienia do wizualizacji siarczanowych glikozaminoglikanów w żelach poliakryloamidowych
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 3:15 min. • July 8th, 2025
Siarczanowane glikozaminoglikany, GAG, są długimi, ujemnie naładowanymi, liniowymi polisacharydami z powtarzającymi się łańcuchami jednostek disacharydowych zasiarczonymi w różnych pozycjach, występującymi w różnych długościach.
Aby uwidocznić izolowane zasiarczone GAG o znaczeniu różniącym się długością łańcucha w żelu poliakrylamidowym po elektroforezie, ostrożnie wyjmij żel z kasety. Spłucz wodą dejonizowaną, usuwając dołączone kawałki żelu, które mogą zakłócać barwienie.
Potraktuj kwaśnym roztworem błękitu alckiego. W kwaśnych warunkach błękit alcyjny, wielowartościowy barwnik kationowy z atomem miedzi w środku, specyficznie oddziałuje z ujemnie naładowanymi siarczanowymi GAG poprzez oddziaływania jonowe, tworząc ciemnoniebieski kompleks nierozpuszczalny w wodzie.
Umyj żel wodą dejonizowaną i metanolem, usuwając wszelkie pozostałości plam. Inkubować żel z alkalicznym roztworem azotanu srebra. W warunkach alkalicznych alcyjskie siarczanowane GAG związane z błękitem zapewniają miejsca dla dodatnio naładowanych jonów srebra do wiązania się i tworzenia kompleksu.
Żel należy traktować w roztworze rozwijającym zawierającym formaldehyd i kwas cytrynowy. Kwas cytrynowy obniża lokalne p
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych