JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 4:15 min. • July 8th, 2025
Siarczanowane glikozaminoglikany, takie jak siarczany heparanu, HS, są ujemnie naładowanymi, liniowymi, siarczanowymi polisacharydami o zmiennej długości łańcuchów, przyłączonymi do białek powierzchniowych komórek.
Aby oszacować różnej długości HS wyizolowane z tkanki płucnej myszy, zacznij od złożenia kasety żelowej. Częściowo wypełnij go wysoko stężonym roztworem akryloamidu-bisakryloamidu, w tym środkami katalizującymi - nadsiarczanem amonu i tetra-metylo-etylenodiaminą. Pokryć wodą, aby zapobiec kontaktowi z powietrzem, co może hamować polimeryzację. Inkubować.
Czynniki katalizujące indukują polimeryzację akrylamidowo-bisakryloamidową, tworząc żel o małej rozdzielczości porów. Wylej wodę. Dodać roztwór akryloamidu-bisakryloamidu o niskim stężeniu ze środkami katalizującymi. Włóż grzebień żelowy, aby stworzyć dołki. Roztwór polimeryzuje, tworząc żel do układania w stosy o dużych porach.
Załaduj komory zbiornika do elektroforezy buforem roboczym, aby zapewnić optymalną przewodność elektryczną podczas elektroforezy.
Rozpuścić mieszaninę HS w buforze ładującym zawierającym barwnik śledzący i sacharozę. Następnie przenieś tę mieszaninę i standardowe drabinki HS do studzienek kasetow
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych