Elektroforeza w żelu poliakryloamidowym z dodecylosiarczanem sodu do analizy białek: technika oddzielania i wizualizacji białek na podstawie masy cząsteczkowej

Rozpocząć od potraktowania próbki białka buforem denaturującym zawierającym detergent - dodecylosiarczan sodu, SDS i środek redukujący - beta-merkaptoetanol. Podgrzej go krótko. Na tym etapie beta-merkaptoetanol przerywa wiązania dwusiarczkowe, nadając białku rozwiniętą konformację.

Rozwinięte białka z odsłoniętymi aminokwasami hydrofobowymi wiążą się z ujemnie naładowanym SDS i uzyskują jednorodny ładunek ujemny. Dodaj odpowiedni barwnik śledzący do próbki, aby uzyskać wizualizację w czasie rzeczywistym.

Teraz załaduj próbkę i standardowy marker wielkości cząsteczki do oddzielnych studzienek obecnych w żelu do układania w stos - górnej warstwie żelu poliakrylamidowego zawierającej niższe stężenie usieciowanych polimerów akryloamidu.

Podłącz aparat żelowy wypełniony buforem do zasilania.

W obecności pola elektrycznego ujemnie naładowane białka swobodnie migrują w kierunku anody i układają się razem, aby dostać się do żelu rozdzielczego - dolnej warstwy zawierającej żel o wyższym stężeniu.

W żelu rozdzielczym białka zaczynają migrować zgodnie z ich wielkością cząsteczkową, przy czym mniejsze białka migrują szybko, co skutkuje optymalnie rozwiązanymi prążkami białkowymi. Następnie pr