JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 5:34 min. • July 8th, 2025
Na początek weź próbkę zawierającą fluorescencyjnie znakowane fosforylowane i niefosforylowane oligonukleotydy RNA zmieszane z barwnikiem ładującym zawierającym mocznik. Podgrzać próbkę.
Mocznik - silny denaturant - w połączeniu z ciepłem denaturuje drugorzędową strukturę RNA, w wyniku czego powstaje jego zlinearyzowana i nieustrukturyzowana konformacja. Teraz odlej żel, mieszając roztwór akrylamidu-bisakryloamidu z mocznikiem.
Dodaj tetrametylenodiaminę, katalizator i nadsiarczan amonu, środek utleniający, aby ułatwić późniejszą polimeryzację żelu.
Wlej roztwór do wstępnie zmontowanego aparatu kasetowego. Włóż grzebień, tworząc dołki do ładowania próbki. Pozwól żelowi spolimeryzować. Umieść kasetę w aparacie żelowym. Dodaj bufor do pracy do górnego i dolnego zbiornika, utrzymując przepływ prądu przez cały żel. Wyjmij grzebień.
Załaduj próbkę zmieszaną z barwnikiem wizualizacyjnym do studzienki i podłącz żel do źródła zasilania o żądanym napięciu. Mocznik zawarty w żelu umożliwia cząsteczkom RNA migrację jako gatunki liniowe.
Żel działa jak sito, umożliwiając ujemnie naładowanym cząsteczkom RNA przemieszczanie się przez pory w kierunku elektrody dodatniej. Podczas biegu ufosforylow
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych