JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 3:06 min. • July 8th, 2025
Włókna amyloidowe to agregaty nieprawidłowo sfałdowanych białek, które wykazują niejednorodność wielkości. Włókna te, będąc odporne na anionowe detergenty, takie jak SDS, mogą być analizowane za pomocą dwuwymiarowej elektroforezy w żelu agarozowym półdenaturującym.
Na początek weź wstępnie zmontowany, duży żel agarozowy o dużych porach, który zawiera SDS. Wysoka porowatość pozwala na oddzielenie nienaruszonych włókien podczas biegu. Na żel nałożyć bufor do biegania zawierający SDS.
Załaduj do żelu lizat komórkowy zawierający włókna amyloidowe. Obecność SDS i brak etapu podgrzewania próbki tworzy warunki półdenaturacji, w których detergent wiąże się z wysoce odpornymi amyloidami, nadając nienaruszonym włóknom równomierny ładunek ujemny.
Uruchom żel w pierwszym wymiarze przy odpowiednim napięciu. Pole elektryczne powoduje migrację ujemnie naładowanych amyloidów w kierunku dodatnio naładowanej anody.
Podczas biegu mniejsze włókna migrują szybko w porównaniu z większymi - tworząc rozmazany wzór pasma wskazujący na niejednorodność rozmiaru.
Po zakończeniu obróć żel prostopadle i uruchom go w drugim wymiarze. W tym wymiarze włókna poruszają się identycznie jak w pierwszym ciągu, rozdziel
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych