Elektroforeza w żelu poliakrylamidowym niebieskim: technika separacji bez denaturacji do analizy nienaruszonych kompleksów mitochondrialnych łańcuchów oddechowych

0 views • 3:10 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Aby przeanalizować pięć kompleksów mitochondrialnych łańcucha oddechowego z nienaruszonymi podjednostkami, należy uzyskać kompleksy mitochondrialne rozpuszczone w łagodnym, niejonowym detergentzie. Wymieszać z buforem zawierającym Coomassie Blue-G, anionowy barwnik.

Coomassie zastępuje detergent i wiąże się niespecyficznie z kompleksami, nadając ładunek ujemny i barwiąc je na niebiesko. Dodatkowo Coomassie zapobiega agregacji kompleksów i pomaga zachować ich naturalną strukturę i funkcję.

W zbiorniku do elektroforezy zmontuj kasetę żelową składającą się z żelu o gradientowej rozdzielczości ze zmniejszającą się wielkością porów na całej długości, pokrytej żelem do układania w stosy o dużej wielkości porów. Napełnij komory anody i katody schłodzoną anodą i buforem katodowym zawierającym Coomassie.

Załaduj studzienki mieszaniną kompleksu białek związanych Coomassie. Zainicjuj elektroforezę.

Ujemnie naładowane kompleksy białkowe migrują z żelu układającego się w stos do żelu o rozdzielczości gradientowej, w kierunku dodatnio naładowanej anody. Podczas gdy mniejsze kompleksy szybko przechodzą przez pory, większe kompleksy są spowalniane przez ograniczone rozmiary porów, gdy przesuwają się w dół żelu rozdzielczego.

Coomassie oddzielony od kompleksów podczas przebiegu jest zastępowany przez Coomassie w buforze katodowym, zapobiegając przesunięciu się kompleksów z ich odpowiednich pozycji w żelu. Po elektroforezie zwizualizuj żel. Kompleksy mitochondrialne pojawiają się jako niebieskie pasma rozdzielone w zależności od wielkości.

Kompleks II o najniższej masie cząsteczkowej zajmuje najniższą pozycję w żelu, a następnie kompleks IV, III i V. Kompleks I o najwyższej masie cząsteczkowej zajmuje najwyższą pozycję.

Aby wykonać elektroforezę z niebieskim natywnym żelem, najpierw dodaj bufor z niebieską katodą do kasety żelowej. Za pomocą pipety umyj i napełnij studzienki niebieskim buforem katodowym. Następnie załaduj od 5 do 30 mikrogramów próbek białka do studzienek. Delikatnie napełnij kasetę żelową do góry niebieskim buforem katodowym, a zbiornik buforem anodowym.

Najpierw uruchom żel przy stałym napięciu 40 woltów przez 15 minut. Następnie zwiększ napięcie do 80 woltów. Uruchom żel, aż barwnik osiągnie 2/3 długości żelu. Zastąp niebieski bufor katodowy buforem katodowym i kontynuuj elektroforezę, aż czoło barwnika spłynie z żelu.

07:40

Multimer-PAGE: Metoda wychwytywania i rozdzielania kompleksów białkowych w próbkach biologicznych

Related Videos

0 Views

09:35

Rozwiązywanie kompleksów białkowych oczyszczonych z powinowactwa za pomocą Blue Native PAGE i profilowania korelacji białek

Related Videos

0 Views

08:37

Analiza superkompleksów mitochondrialnego łańcucha transportu elektronów za pomocą natywnej elektroforezy, testów w żelu i elektroelucji

Related Videos

0 Views

12:42

Sondowanie aktywności kompleksu mitochondrialnego w ludzkich embrionalnych komórkach macierzystych

Related Videos

0 Views

12:03

Niebieska natywna elektroforeza w żelu poliakrylamidowym (BN-PAGE) do analizy kompleksów wielobiałkowych z lizatów komórkowych

Related Videos

0 Views

08:12

Analiza kompleksów białkowych błony tylakoidowej za pomocą elektroforezy w niebieskim natywnym żelu

Related Videos

0 Views

07:55

Analiza mitochondrialnych kompleksów łańcuchów oddechowych w hodowanych komórkach ludzkich przy użyciu elektroforezy w żelu Blue Native Polyacrylamide i immunoblottingu

Related Videos

0 Views

11:25

Hybrydowa elektroforeza przezroczysta/niebieska natywna do separacji i analizy superkompleksów mitochondrialnych łańcuchów oddechowych

Related Videos

0 Views

08:33

Znakowanie i wizualizacja produktów ekspresji genomu mitochondrialnego w drożdżach piekarskich Saccharomyces cerevisiae

Related Videos

0 Views

08:04

Pomiar mitochondrialnych kompleksów przenoszenia elektronów w wcześniej zamrożonej tkance serca od potomstwa lochy: model do oceny zmian bioenergetyki mitochondrialnej wywołanych wysiłkiem fizycznym

Related Videos

0 Views

Last updated: 4 July 2026