Multimer-PAGE do separacji natywnych kompleksów białkowych: hybrydowa technika separacji składająca się z Blue native-PAGE i SDS-PAGE w celu oddzielenia nienaruszonych białek multimerycznych od lizatu tkankowego

Multimeryczne kompleksy białkowe są niezbędne w różnych procesach biologicznych.

Aby oddzielić kompleksy białkowe w ich stanie naturalnym za pomocą multimeru-PAGE, należy pobrać lizat tkankowy zawierający pożądane kompleksy. Załaduj lizat do zestawu żelowego dla Blue native PAGE.

Napełnij układ alkalicznym buforem zawierającym niebieski barwnik anionowy i podłącz go do zasilania. Przy zasadowym pH cząsteczki barwnika wiążą się z kompleksem białkowym, nadając mu ogólny ładunek ujemny bez denaturacji. Ten ujemnie naładowany, nienaruszony kompleks białkowy migruje przez żel jako niebieska wstęga.

Po minimalnym przebiegu i umożliwieniu migracji nienaruszonego białka do żelu rozdzielczego, należy wyciąć pasek zawierający kompleks. Inkubować pasek w roztworze zawierającym środek sieciujący, aby umożliwić jego reaktywnym grupom interakcję z grupami aminowymi białka proksymalnego, stabilizując kompleks multimeryczny.

Zastąp roztwór sieciujący odczynnikiem hartującym, aby osłabić aktywność nieprzereagowanych środków sieciujących. Dodaj SDS - anionowy detergent - który nadaje nienaruszony kompleks białkowy równomierny ładunek ujemny, zachowując jednocześnie ich naturalny rozmiar i skład.

Umi