JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 3:29 min. • July 8th, 2025
Aby określić wielkość fragmentów DNA za pomocą elektroforezy kapilarnej, zacznij od pobrania wielodołkowej płytki testowej. Każda studzienka zawiera znakowane fluorescencyjnie, różnej wielkości amplikony PCR - dwuniciowe oligonukleotydy DNA uzyskane po cyklu PCR.
Dodaj do studzienki kilka dwuniciowych fragmentów DNA o różnej wielkości, które działają jak wzorzec wielkości. Każda z tych cząsteczek DNA zawiera znacznik fluorescencyjny dla łatwej identyfikacji.
Uzupełnij studnię formamidem, silnym denaturantem i podgrzej w wysokiej temperaturze. Ten etap denaturuje DNA, tworząc jednoniciowe fragmenty, które mogą łatwo migrować przez pory żelu.
Umieść płytkę w analizatorze fragmentów, który zawiera wstępnie wstrzyknięty żel polimerowy do swojego systemu kapilarnego.
Zastosuj wysokie napięcie, aby elektrokinetycznie wprowadzić DNA ze studni do kapilary o cienkiej średnicy na katodzie - ujemnym końcu. Ujemnie naładowane cząsteczki DNA migrują w kierunku dodatnio naładowanej anody. Krótsze nici DNA mają mniejszą siłę tarcia i poruszają się szybciej w żelu niż dłuższe nici DNA.
Podczas elektromigracji DNA przecina drogę wiązki laserowej, co powoduje fluoryzację barwnika. Sygnały emisyjne z
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych