Elektroforeza w żelu alkalicznym z pojedynczymi komórkami: czuła technika ilościowego szacowania uszkodzeń DNA w poszczególnych komórkach rakowych po chemioterapii
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 5:06 min. • July 8th, 2025
Chemioterapeutyki wywołują pęknięcia jedno- i dwuniciowego DNA w komórkach nowotworowych, powodując uszkodzenie DNA i śmierć komórki.
Aby określić ilościowo uszkodzenia DNA, wymieszaj komórki rakowe leczone chemioterapią ze stopioną, niskotopliwą agarozą. Odpipetować tę mieszaninę na szkiełka podstawowe pokryte agarozą. Pozwól, aby stopiona agaroza zestaliła się, osadzając komórki w porowatej matrycy żelowej.
Potraktuj buforem do lizy zawierającym wysokie stężenia detergentów i soli. Detergenty rozpuszczają błony komórkowe i jądrowe. Co więcej, wysoka zawartość soli usuwa białka histonowe z DNA, pozostawiając superskręcone DNA przyłączone do macierzy jądrowej.
Inkubować w alkalicznym buforze do elektroforezy. Środowisko alkaliczne powoduje rozwijanie się superskrętów DNA, odsłaniając pęknięcia jednoniciowego, dwuniciowego DNA.
Umieścić szkiełka w tacce na żel zawierającej bufor do elektroforezy. Zainicjuj elektroforezę.
Będąc naładowanym ujemnie, DNA jest przyciągane w kierunku dodatniej anody. Uszkodzone fragmenty DNA migrują z jądra i przemieszczają się przez porowatą matrycę żelową, przy czym dłuższe fragmenty poruszają się wolniej niż krótsze fragmenty. Wręcz przeciwnie, nieusz
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych