JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 2:44 min. • July 8th, 2025
Białka multimeryczne są stabilizowane przez międzycząsteczkowe, kowalencyjne wiązania dwusiarczkowe między ich resztami cysteinowymi, co ma kluczowe znaczenie dla utrzymania ich integralności strukturalnej i funkcjonalnej.
Aby przeanalizować takie kompleksy za pomocą nieredukującego PAGE, należy przyjąć pożądane stężenie białek stabilizowanych dwusiarczkiem. Dodać nieredukcyjny bufor próbki i podgrzać próbkę.
Ten bufor zawiera SDS, który nadaje białkom ogólny ładunek ujemny oraz barwnik śledzący, który wizualizuje ich ruch w żelu. W buforze nie ma żadnego środka redukującego, co pozwala wiązaniom dwusiarczkowym pozostać nienaruszonym, ułatwiając utrzymanie kompleksu multimerycznego w stanie nienaruszonym.
Załaduj poszczególne kompleksy do studzienek żelu poliakrylamidowego o pożądanej zawartości procentowej, wstępnie zmontowanego w aparacie żelowym. Dodaj drabinkę białkową o znanym rozmiarze do innego dołka. Zanurz studnie w działającym buforze opartym na SDS i podłącz urządzenie do źródła zasilania.
Prąd elektryczny zmusza ujemnie naładowane kompleksy białkowe do przemieszczania się przez pory żelu w kierunku anody - dodatniego końca. Ponieważ kompleksy białkowe są jednolicie nała
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych