JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 7:37 min. • July 8th, 2025
W przypadku dwuwymiarowej elektroforezy żelowej mieszaniny białek pochodzących z homogenizowanej tkanki nowotworowej należy potraktować buforem zawierającym chaotropy, detergent obojczojonowy i środek redukujący. Chaotropy i detergenty denaturują i rozpuszczają białka. Czynniki redukujące redukują wiązania dwusiarczkowe białek, generując wolne grupy tiolowe i rozwijając białka w celu uzyskania optymalnej rozdzielczości białek.
Przenieś poddaną działaniu mieszaniny białek do unieruchomionego gradientu pH, IPG, uchwytu paska. Umieścić pasek IPG zawierający liniowy gradient pH w matrycy żelu akrylowo-żelowego. Dodaj olej mineralny, aby zapobiec parowaniu roztworu białkowego. Przenieś uchwyt do izoelektrycznego systemu ogniskowania IEF. Poczekaj, aż roztwór białka ponownie nawodni pasek.
Wykonaj pierwszy wymiar IEF. Prąd elektryczny powoduje, że naładowane białka migrują przez gradient pH w kierunku przeciwnie naładowanych elektrod, unieruchamiając się w odpowiednich punktach izoelektrycznych - pH, przy którym białka mają zerowy ładunek netto.
Po IEF potraktuj pasek IPG dodecylosiarczanem sodu, SDS, anionowym detergentem, który nadaje białkom ładunek ujemny. Równoważyć ze środkiem alki
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych