JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 4:04 min. • July 8th, 2025
Zacznij od monowarstwy komórek nabłonkowych w odpowiednim pożywce hodowlanej. Komórki te wyrażają integryny - receptory powierzchniowe obejmujące błonę. Pożywka hodowlana zawiera fibronektynę wydzielaną przez komórki nabłonkowe - glikoproteinę.
Dodać zawiesinę Staphylococcus aureus - bakterii chorobotwórczej Gram-dodatniej - do płytki hodowlanej. Bakterie te zawierają białka wiążące fibronektynę lub FnBP zakotwiczone w ich ścianie komórkowej.
Inkubuj płytkę, aby zainicjować infekcję bakteryjną, w której fibronektyna wiąże się z FnBP bakterii i integrynami na nabłonkowych komórkach gospodarza. Ta trójstronna interakcja FnBP-fibronektyna-integryna pośredniczy w internalizacji bakterii w gospodarzu.
Potraktuj komórki lizostafiną - enzymem endopeptydazy - i inkubuj. Lizostafina selektywnie wnika do ścian komórkowych bakterii zewnątrzkomórkowych. Rozszczepia mostki pentaglicyny w peptydoglikanach, powodując ich lizę, podczas gdy bakterie wewnątrzkomórkowe pozostają chronione przed lizostafiną.
Uzupełnij kulturę enzymem proteolitycznym, aby dezaktywować pozostałą lizostafinę, zapobiegając zabijaniu bakterii wewnątrzkomórkowych na etapach.
Dodaj bufor do lizy do hodowli, który rozrywa kom
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych