Test przesiewowy nematocydów drobnocząsteczkowych: metoda o średniej przepustowości do badania przesiewowego potencjalnych nematocydów przeciwko Ditylenchus dipsaci

0 views • 3:48 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nicienie pasożytujące na roślinach, takie jak Ditylenchus dipsaci, są mikroskopijnymi robakami. Żywe robaki wykazują ruchy sinusoidalne poprzez skurcze mięśni, a ich ruchliwość jest ważnym wyznacznikiem ich zdrowia w warunkach hodowli.

Narażenie na nematocydy - chemiczne toksyny, może zakłócać kluczowe procesy biologiczne, wpływając na mobilność tych hodowanych nicieni, prowadząc do ich śmierci.

Aby przesiać małocząsteczkowe nematocydy, weź destylowaną płytkę wielodołkową zawierającą wodę. Za pomocą czystego narzędzia do przypinania przenieś potencjalne drobnocząsteczkowe nematocydy z chemicznej płytki wyjściowej na płytkę testową, aby zapewnić przeniesienie stałej ilości cząsteczek do każdej studzienki.

Dozuj równą liczbę nicieni do każdego dołka na talerzu. Uszczelnij płytki, utrzymując wilgotne warunki, aby ułatwić przetrwanie i mobilność nicieni. Inkubować płytkę z łagodnym mieszaniem, aby zapobiec osiadaniu robaków.

Podczas inkubacji różne toksyczne małe cząsteczki działają na robaki i zabijają je, podczas gdy nietoksyczne nie mają wpływu. Obserwuj płytkę pod mikroskopem preparacyjnym, aby zidentyfikować studzienki z populacją robaków nieruchliwych.

Uzupełnić płytki testowe roztworem wodorotlenku sodu - stymulantem chemicznym punktu końcowego. Powoduje to ruch wszelkich odpoczywających robaków i odróżnia je od martwych.

Obecność nieruchomych robaków po obróbce wodorotlenkiem sodu w niektórych studzienkach potwierdza skuteczność odpowiadających im małych cząsteczek jako nematocydów.

Aby przygotować płytki testowe, wlej autoklawowaną wodę destylowaną do sterylnego koryta i dozuj 40 mikrolitrów destylowanej wody z koryta do każdej studzienki płaskodennej, 96-dołkowej płytki za pomocą wielokanałowej pipety. Dodaj substancje chemiczne z 96-dołkowych płytek wyjściowych do próbek chemicznych, trzykrotnie wbijając je w płytkę chemiczną. Następnie przenieś kołki 10 razy na płytkę testową. Zetrzyj na papierze przed roztworem czyszczącym.

Aby policzyć liczbę nicieni z kolekcji, najpierw ponownie zawiesić kolekcję, a następnie odpipetować 5 mikrolitrów roztworu za pomocą końcówek o niskiej retencji na szkiełku. Policz liczbę nicieni w 5 mikrolitrach za pomocą mikroskopu preparacyjnego. Następnie dostosuj stężenie do dwóch robaków na mikrolitr za pomocą sterylnej wody destylowanej.

Następnie dodaj 10 mikrolitrów próbki do każdej studzienki z 96-dołkowych płytek za pomocą wielokanałowej pipety i koryta. Owiń talerze wilgotnym ręcznikiem papierowym i umieść je w pudełku. Następnie dodaj dodatkowo wilgotny ręcznik papierowy, aby ustabilizować i zapewnić minimalny ruch płytek, a następnie przymocuj lepką podkładkę w inkubatorze wytrząsającym o temperaturze 20 stopni Celsjusza ustawionym na 200 obr./min.

Obserwuj płytki w dniu 5 pod mikroskopem preparacyjnym. Policz liczbę ruchomych i całkowitych D. dipsaci w kontrolach rozpuszczalnikowych DMSO i studzienkach poddanych działaniu leków.

Jeśli robaki są nieruchome, dodaj 2 mikrolitry 1 molowego wodorotlenku sodu do końcowego stężenia 40 milimolów do studzienki, aby stymulować ruch. Oblicz proporcję robaków mobilnych. Na ekranach D. dipsaci studnie, które w sposób powtarzalny dały 0% ruchomych robaków, są klasyfikowane jako silne trafienia.

11:56

Szybki i specyficzny test mikropłytkowy do oznaczania wewnątrz- i zewnątrzkomórkowego askorbinianu w hodowanych komórkach

Related Videos

0 Views

06:51

Wysokoprzepustowe badania przesiewowe enzymów rozkładających węglowodany przy użyciu nowatorskich zestawów do oznaczania nierozpuszczalnych substratów chromogennych

Related Videos

0 Views

08:58

Wykorzystanie Caenorhabditis elegans do badania trans- i wielopokoleniowych skutków substancji toksycznych

Related Videos

0 Views

11:46

Sita o wysokiej i niskiej przepustowości z nicieniami węzłów korzeniowych Meloidogyne spp.

Related Videos

0 Views

12:43

Elektroantennograficzny test biologiczny jako narzędzie przesiewowe w kierunku substancji lotnych roślin żywicielskich

Related Videos

0 Views

02:35

Wielodołkowy test na bazie płynu do badań przesiewowych nokautów C. elegans

Related Videos

0 Views

06:28

C. elegans (C. elegans) Test chemotaksji

Related Videos

0 Views

10:55

Kompleksowa ocena toksyczności chemicznej linii rozrodczej z wykorzystaniem nicienia Caenorhabditis elegans

Related Videos

0 Views

11:43

Przesiewowy test in vivo dla modulatorów mitochondrialnych przy użyciu transgenicznych bioluminescencyjnych Caenorhabditis elegans

Related Videos

0 Views

09:44

Zautomatyzowana analiza populacyjnego testu preferencji chemosensorycznej na podstawie populacji nicieni

Related Videos

0 Views

Last updated: 4 July 2026