Test żerowania komarów: metoda oceny wpływu badanego związku na śmiertelność i płodność dorosłych samic komarów

Rozpocząć test żerowania komarów od przygotowania posiłku z krwi, dodając pożądane stężenie aktywnego związku testowego do zdefibrynowanej krwi królika. Mączka z krwi nie zawiera fibryny, co zapobiega krzepnięciu krwi.

Załaduj tę mączkę z krwi do portu tłocznego jednostki karmiącej membraną. Podłącz go do urządzenia grzewczego, utrzymując krew w optymalnej temperaturze. Pokryj membranę roztworem kwasu mlekowego.

Umieść to urządzenie w klatce z dorosłymi, wstępnie wygłodzonymi samicami komarów, aby zwiększyć szanse na żerowanie. Wysiaduj w ciemności. Kwas mlekowy przyciąga komary w kierunku jednostki karmienia. Ciemne warunki zachęcają je do żerowania.

Przenieś komary karmione krwią do komory wzrostowej. Po strawieniu mączki z krwi aktywny związek testowy dostaje się do organizmu komara, wpływając na różne narządy i powodując śmierć niektórych z nich.

Policz liczbę martwych komarów i oblicz śmiertelność. Należy ocenić wpływ badanej substancji chemicznej na układ rozrodczy komarów, które przeżyły, wprowadzając do komory kubek na jaja.

Samice komarów wykorzystują białka z mączki z krwi i składają jaja, które zbierają się w kubku. Policz liczbę jaj, szacując spadek płodności - zdolności do składania jaj.

Wysoka śmiertelność i niska płodność odpowiadają zdolności owadobójczej związku.

Zbierz około 150 cztero- do pięciodniowych dorosłych samic komarów za pomocą aspiratora i przenieś je do osobnej klatki. Usuń źródło cukru od 1 do 24 godzin przed testem karmienia.

Przygotować 80-milimolowy roztwór podstawowy badanego związku w wodzie. Następnie należy go seryjnie rozcieńczyć wodą, aby uzyskać robocze roztwory podstawowe o pożądanych stężeniach.

Aby uzyskać pożądane stężenia testowe, dodaj 40 mikrolitrów każdego rozcieńczenia do 960 mikrolitrów zdefibrynowanej krwi królika w 1,5-mililitrowej probówce i wymieszaj pipetując. Umieść filtr membranowy na jednostce podającej i uszczelnij go gumowym pierścieniem.

Następnie za pomocą pipety przenieś 1 mililitr krwi z roztworem testowym przez port podawania znajdujący się po odwrotnej stronie jednostki podającej. Podłącz podajnik do urządzenia grzewczego. Następnie delikatnie przetrzyj powierzchnię membrany świeżo przygotowanym 10% roztworem kwasu mlekowego.

Umieść jednostkę karmiącą w klatce. Przykryj klatkę ciemną szmatką i pozwól komarom żerować przez godzinę. Po nakarmieniu komarów umieść klatkę w lodówce w temperaturze 4 stopni Celsjusza na pięć minut, aby znieczulić komary. Następnie policz i zapisz całkowitą liczbę komarów w klatce.

Badając jamę brzuszną, policz i zapisz całkowitą liczbę w pełni i częściowo odżywionych samic komarów. W jednej dawce należy uzyskać co najmniej 50 komarów karmionych krwią. Usuń wszelkie komary, które nie karmiły. Następnie przenieś klatkę do komory wzrostowej i użyj arkusza wyników, aby zapisać liczbę martwych komarów w odpowiednich punktach czasowych.

W 3 dniu po karmieniu krwią umieść kubek na jajka w klatce na 72 godziny. Użyj mikroskopu preparacyjnego, aby policzyć całkowitą liczbę jaj wyprodukowanych podczas jednego zabiegu.