Test lucyferazy w celu zbadania skuteczności przeciwpasożytniczych substancji chemicznych przeciwko pasożytom

Toxoplasma gondii — pasożytniczy pierwotniak — rozmnaża się wyłącznie w jądrzastych komórkach zwierzęcych gospodarza. Atakuje komórki gospodarza poprzez proces endocytarny, tworząc parazytoforyczną wakuolę. Wewnątrz wakuoli pasożyt połyka białka cytozolowe, pozyskując składniki odżywcze do wzrostu.

Aby sprawdzić skuteczność przeciwpasożytniczych chemikaliów na pasożyty wewnątrz komórek gospodarza, należy pobrać płytkę testową zawierającą przylegającą kulturę ludzkich fibroblastów napletka w wielu studzienkach.

Dozuj równe ilości pasożytów Toxoplasma wyrażających lucyferazy - enzym wytwarzający luminescencję - do każdej studzienki. Inkubuj, pozwalając pasożytom zaatakować komórki gospodarza i rosnąć w wakuoli parazytoforycznej.

Po inkubacji odessać pożywkę, usuwając niepołknięte pasożyty. Uzupełnij studzienki różnymi stężeniami związku przeciwpasożytniczego ukierunkowanego na proteazę cysteinową i inkubuj.

Cząsteczki leku dostają się do komórki gospodarza, aby dotrzeć do pasożytów. Po dostaniu się do środka lek hamuje enzym proteazy cysteinowej pasożyta, zakłócając pobieranie składników odżywczych przez pasożyta związanego z żywicielem i zatrzymując jego wzrost.

Odessać pożywkę zawi