JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 3:40 min. • April 30th, 2023
Trypanosoma cruzi, obligatoryjny pasożyt wewnątrzkomórkowy, atakuje komórki gospodarza ssaków jako trypomastigota - wiciowa, nieproliferacyjne stadium rozwojowe - i różnicuje się w niewiciowe amastigoty, które namnażają się w cytoplazmie przez rozszczepienie binarne.
Po proliferacji amastigoty różnicują się z powrotem w trypomastigoty, które zakłócają wejście komórek gospodarza do krążenia, powodując infekcję ogólnoustrojową.
Aby ocenić potencjał cytotoksyczny in vitro badanego leku przeciwpasożytniczego przeciwko Trypanosoma cruzi, należy rozpocząć od hodowli transgenicznych pasożytów Trypanosoma cruzi - w pożądanym stadium rozwojowym - stabilnie eksprymujących enzym β-galaktozydazę.
Zawieś pasożyty w odpowiednich podłożach. Przenieść na płytkę wielodołkową. Dodać odpowiednie stężenia badanego leku przeciwpasożytniczego. Inkubować.
Lek biernie dyfunduje przez błony pasożytów i jest metabolizowany do toksycznych produktów pośrednich. Metabolity te dostają się do jąder i powodują uszkodzenia DNA, hamując syntezę białek, w tym β-galaktozydazy, negatywnie wpływając na żywotność pasożytów.
Zastąp pożywkę zawierającą lek buforem, aby zapobiec interferencji koloru podczas pomiaru absorba
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych