Test śmierci neuronalnej w celu oceny śmierci komórki w modelu padaczki ex vivo

Padaczka – spontaniczne i nawracające napady w mózgu – prowadzi do śmierci komórek neuronalnych.

Aby zbadać śmierć neuronów w modelu padaczki ex vivo, zacznij od pobrania organotypowego wycinka kory nosa i hipokampa - przygotowanego z mózgu szczeniaka szczura - w odpowiednim podłożu.

Wycinek organotypowy składa się z kory nosa i hipokampa. Pod wpływem stopniowej deprywacji surowicy, regiony te obrazują ewoluujące zdarzenia padaczkowe, prowadzące do śmierci neuronów wywołanej napadami.

Dodać wymaganą ilość jodku propidyny, PI - barwnika fluorescencyjnego - do kultury i inkubować. Przez uszkodzoną błonę komórkową PI dostaje się do martwych neuronów i wiąże się z DNA; żywe neurony, z nienaruszoną błoną, nie są zdolne do wychwytu PI.

Umieść plasterek organotypowy na szkiełku mikroskopowym w celu barwienia immunologicznego. Dodać roztwór blokujący przepuszczalność i inkubować.

Cząsteczki detergentu w roztworze rozpuszczają lipidy błonowe, tworząc pory w błonie nienaruszonych komórek - czyniąc je przepuszczalnymi dla kolejnych etapów barwienia immunologicznego. Białka w roztworze blokującym biernie wiążą się z niespecyficznymi miejscami komórek, zmniejszając barwienie tła.

Dodaj pierwszo