Test kiełkowania naczyniówki w celu zbadania proliferacji mikrokrążenia gałki ocznej ex vivo

0 wyświetleń3:48 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

W oku ssaków naczyniówka, znajdująca się między twardówką a siatkówką, zawiera makrofagi okołonaczyniowe i naczyniówkę włosowatą - warstwę naczyń włosowatych krwi wyłożoną perycytami, która dostarcza tlen i składniki odżywcze do siatkówki. Nieprawidłowe naczynie krwionośne wyrastające z naczyniówki występuje w wielu naczyniowych chorobach oczu.

Aby zbadać rozregulowaną naczyniówkę włosowatą kiełkującą ex vivo, weź zebrane eksplantaty oczu myszy zawierające naczyniówkę przyczepioną do twardówki i nabłonka barwnikowego siatkówki lub RPE.

Dodaj kropelki ekstraktu z błony podstawowej lub BME - hydrożelu wzbogaconego w białka macierzy zewnątrzkomórkowej - do studzienek płytki wielodołkowej. Umieść eksplantaty w kropli, unikając spłaszczania tkanek. Pozwól, aby BME zestalił się.

Dodać pożywkę uzupełnioną komórkami śródbłonka lub czynnikami wzrostu specyficznymi dla EC. Inkubować. RPE wydziela czynnik wzrostu śródbłonka naczyń krwionośnych, który wraz z czynnikami wzrostu specyficznymi dla EC stymuluje proliferację EC naczyń włosowatych.

Zestalony BME tworzy macierz zewnątrzkomórkową, która sprzyja proliferacji EC do tworzenia kiełkujących kanalików kapilarnych. Perycyty migrują i przyczepiają się do tych kiełkujących naczyń włosowatych, ułatwiając dojrzewanie naczyń włosowatych EC.

Aktywowane makrofagi w regionie kiełkowania wydzielają enzymy do trawienia błony Brucha - najbardziej wewnętrznej warstwy naczyniówki - która umożliwia kiełkom migrację do RPE.

Pod mikroskopem uwidocznij kiełkujące naczynia włosowate. Za pomocą odpowiedniego oprogramowania zmierz obszar pokryty kiełkiem naczyniówki.

Większy obszar kiełkowania naczyniówki wskazuje na postępujące kiełkowanie naczyniówkowo-naczyniówki w eksplantacie.

Dodaj 30 mikrolitrów rozmrożonego BME do środka każdego dołka 24-dołkowej płytki do hodowli tkankowej. Upewnij się, że kropla BME tworzy wypukłą kopułę na dnie płytki, nie dotykając krawędzi.

Umieść tkankę na środku BME. Nie spłaszczaj eksplantatu naczyniówki. Pozwól tkance rozszerzyć się w obrębie BME. Inkubuj płytkę w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 10 minut, aby żel stężał. Następnie dodaj 500 mikrolitrów kompletnego klasycznego podłoża do każdej studzienki. Zmieniaj klasyczne podłoże co drugi dzień.

Kiełkowanie naczyniówki można zaobserwować po trzech dniach pod mikroskopem. Otwórz obraz kiełkowania naczyniówki za pomocą obrazu J i zaznacz "Obraz | Rodzaj | i 8-bitowy" ze skalą szarości. Następnie zoptymalizuj kontrast, wybierając "Obraz | Dostosuj | Jasność/Kontrast" i dostosowując go.

Użyj funkcji "Magiczna różdżka", aby obrysować i usunąć tkankę naczyniówki, która znajduje się w środku kiełków. Usuń tło obrazu za pomocą bezpłatnych narzędzi do zaznaczania.

Następnie przejdź do "Obraz | Dostosuj | Próg " i użyj funkcji "Próg", aby zdefiniować kiełki mikronaczyniowe na tle i na obrzeżach. Kliknij "F2", a pojawi się podsumowanie. Kliknij "Zapisz", aby zapisać obraz wybranego obszaru w tym samym folderze, co oryginalny obraz, do wykorzystania w przyszłości.

Po zmierzeniu grupy próbek skopiuj zarejestrowane dane do analizy.

06:54

Rozwarstwienie ludzkiej siatkówki i naczyniówki RPE w celu analizy proteomicznej

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:46

Kriowycinki siatkówki, całe wierzchowania i hipotoniczne izolowane preparaty naczyniowe do immunohistochemicznej wizualizacji perycytów mikronaczyniowych

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

12:42

Izolacja tętniczek siatkówki do badań fizjologii komórek ex vivo

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:32

Ocena regeneracji naczyń w OUN za pomocą siatkówki myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

11:49

Test mikrokieszeni rogówki: model angiogenezy w oku myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:56

In vivo (in vivo) Multimodalne obrazowanie i analiza mysiego modelu neowaskularyzacji naczyniówki indukowanej laserem

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:26

Kompleksowa procedura oceny wydajności in vitro przypuszczalnego neowaskularyzmu naczyniaka zarodkowego przy użyciu testu kiełkowania sferoidalnego

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:47

Standaryzowany i skalowalny test do badania perfundowanego angiogennego kiełkowania 3D komórek śródbłonka pochodzących z iPSC in vitro

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

06:10

Test kiełkowania naczyniówki ex vivo w angiogenezie mikronaczyniowej oka

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:32

Monitorowanie dynamicznego wzrostu naczyń siatkówki w mysim modelu retinopatii indukowanej tlenem

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

Ostatnia aktualizacja: 15 sierpnia 2026