JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 4:28 min. • July 8th, 2025
Metylacja reszty cytozyny DNA jest cechą charakterystyczną leukocytów lub białych krwinek.
Reakcja łańcuchowa polimerazy kropelkowej (mdPCR) umożliwia jednoczesną identyfikację wielu regionów metylowanego DNA w leukocytach.
Przygotuj mieszaninę zawierającą bufor reakcyjny, polimerazę DNA i wodę wolną od nukleaz. Dodaj startery do przodu i do tyłu oraz sondy hydrolizy fluorescencyjnej specyficzne dla każdego regionu docelowego. Sondy składają się z różnokolorowych reporterów fluoroforowych połączonych z wygaszaczami w celu zahamowania emisji fluorescencji.
Dodaj DNA przekształcone w wodorosiarczyn, w którym niemetylowane cytozyny są deaminowane do uracyli, podczas gdy metylowane cytozyny pozostają niezmienione. Mieszać.
Napełnij szklaną strzykawkę mieszaniną oleju nośnikowego i środka powierzchniowo czynnego, a drugą mieszanką oleju nośnikowego i PCR i podłącz je do generatora kropel mikroprzepływowych. Mieszanina oleju nośnikowego i wodnego PCR emulguje do kropelek o wielkości poniżej nanolitrów. Surfaktant stabilizuje emulsję i zapobiega łączeniu się kropel.
Zbierz kropelki i wykonaj PCR. W każdej kropelce wysoka temperatura denaturacji denaturuje dwuniciowy DNA na jednoniciowy DN
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych