Techniki PCR

Ten film pokazuje rolę cyfrowej reakcji łańcuchowej polimerazy kropelkowej w identyfikacji mutacji indel w próbce DNA. Wysoka precyzja i czułość ddPCR umożliwiają dokładne i spójne wykrywanie rzadkich mutacji obecnych w próbce, nawet przy niskich poziomach. Może identyfikować i określać ilościowo mutacje indel w różnych regionach genomu, dostarczając cennych informacji na temat mechanizmów mutacji i funkcjonalnych konsekwencji tych mutacji.

Ten film demonstruje gradientową reakcję łańcuchową polimerazy w celu optymalizacji temperatury wyżarzania podkładów, która ustawia gradientową temperaturę wyżarzania wzdłuż studni. Wpływ różnych temperatur wyżarzania zależy od wydajności amplifikowanych produktów, co pomaga zoptymalizować warunki reakcji.

W tym filmie demonstrujemy technikę duplex digital PCR (ddPCR) — modyfikację tradycyjnej techniki PCR, która jest przydatna do jednoczesnego wykrywania dwóch różnych markerów genetycznych. Pojedyncza reakcja PCR jest dzielona na zemulgowane kropelki o wielkości nanolitrów, które są niezależnie amplifikowane, a wykrywanie różnokolorowych sygnałów amplifikacji fluorescencji z frakcji kropel służy do obliczenia początkowego stężenia sekwencji docelowych.

Ten film demonstruje ilościową metodę wykrywania infekcji wirusowej za pomocą PCR z odwrotną transkrypcją w czasie rzeczywistym. Krok odwrotnej transkrypcji przekształca RNA w cDNA, które jest następnie amplifikowane w cyklach PCR. Obecność wirusowego RNA w próbce potwierdza się analizując krzywe amplifikacji i dysocjacji DNA uzyskane z PCR.

Ten film opisuje reakcję łańcuchową polimerazy blokującej typu dzikiego, czyli WTB-PCR, która wykrywa mutacje somatyczne. Technika oparta na PCR wykorzystuje zablokowany kwas nukleinowy lub LNA, oligonukleotyd, który wiąże się ze swoim komplementarnym allelem typu dzikiego i blokuje jego wydłużenie. Blokowanie selektywnie umożliwia amplifikację zmutowanych alleli niskiego poziomu w stosunku do ich wariantów typu dzikiego w próbce.

W tym filmie omawiamy ilościową reakcję łańcuchową polimerazy, qPCR, w celu wyliczenia bakteriofagów T7 poprzez kwantyfikację DNA. Barwnik fluorescencyjny w mieszaninie PCR wiąże się z nowo zsyntetyzowanymi niciami DNA i emituje fluorescencję, która jest mierzona.

Ten film opisuje technikę amplifikacji jednoniciowego DNA za pomocą mikrosfer polimerowych pokrytych oligonukleotydami w reakcji jednoprobówkowej. W wyniku tego procesu uzyskuje się czyste jednoniciowe DNA, które można dalej wykorzystać do sekwencjonowania DNA i analizy mikromacierzy.

Ten film opisuje zagnieżdżoną reakcję łańcuchową polimerazy, technikę, która składa się z dwóch sekwencyjnych procesów amplifikacji PCR przy użyciu dwóch zestawów starterów. Pierwszy zestaw starterów jest przeznaczony do wyżarzania do sekwencji poprzedzających drugi zestaw, co powoduje selektywną amplifikację określonych sekwencji genów. Ten PCR jest bardziej czuły i specyficzny niż zwykły PCR i jest szeroko stosowany jako technika wykrywania różnych chorób.

W tym filmie opisujemy technikę topnienia PCR o wysokiej rozdzielczości, aby określić polimorfizm długości fragmentów DNA o różnych długościach sekwencji, na podstawie analizy temperatury topnienia.

Ten film demonstruje technikę reakcji łańcuchowej polimerazy kropelkowej multipleksowej do jednoczesnej kwantyfikacji regionów metylowanego DNA w różnych populacjach białych krwinek jako wczesnego biomarkera dla diagnozy klinicznej i prognozowania.

Ten film pokazuje użyteczność cyfrowego PCR w formacie chip-in-a-tube do wykrywania zmian pojedynczych nukleotydów w próbkach DNA. Pojedyncza reakcja PCR jest dzielona na komory, które działają jako niezależne reakcje PCR, a wykrywanie sygnałów fluorescencyjnych ze amplifikowanych celów w komorach służy do obliczenia częstotliwości wariantu allelu w próbce.

Ten film demonstruje cyfrowy PCR oparty na chipie — odmianę techniki cyfrowego PCR, która jest przydatna w wykrywaniu rzadkich wariantów transkryptu. Reakcja PCR jest podzielona na komory nanofluidycznego chipa, z których każdy działa jak niezależna reakcja. Detekcja sygnałów fluorescencyjnych z komór ze wzmocnionymi celami potwierdza obecność w próbce rzadkich wariantów transkryptu.