JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 4:39 min. • July 8th, 2025
Ilościowa plama punktowa — lub QDB — jest przydatną techniką ilościowego określania stężenia docelowych białek w próbce. Po unieruchomieniu próbki na membranie polimerowej białka można wykryć za pomocą immunoblottingu.
Na początek weź płytkę QDB - płytkę wielodołkową z membraną nitrocelulozową przymocowaną do dna każdej studzienki. Dodać próbkę — lizat tkankowy zawierający białko docelowe — w środku błony wewnątrz studzienki.
Pozostawić próbkę do wyschnięcia. Białko docelowe wiąże się z błoną poprzez oddziaływania niekowalencyjne
.Dodaj rozwiązanie blokujące. Białka w roztworze przyłączają się do niezwiązanych miejsc na błonie, zapobiegając niespecyficznemu wiązaniu odczynników wykrywających.
Następnie dodaj roztwór zawierający przeciwciała pierwszorzędowe, które wiążą się z białkiem docelowym w próbce. Umyć w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał.
Następnie dodaj drugorzędowy roztwór przeciwciała. Cząsteczki te - znakowane enzymem peroksydazy - wiążą się z pierwotnymi przeciwciałami związanymi z białkiem. Umyć w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał.
Na koniec dodaj roztwór zawierający podłoże chemiluminescencyjne i nadtlenek wodoru. Wykorzystując nadtlenek wodoru, peroksyda
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych