Techniki blottingu

W tym filmie opisujemy test dot blot w celu ilościowego określenia genomu wirusa. Intensywność sygnału jest bezpośrednio związana z ilością wirusowego DNA w próbce.

Ten film opisuje technikę dot-blot do określania poziomu metylacji DNA w ludzkich chondrocytach in vitro poprzez plamienie próbek DNA na nylonowej membranie i późniejszą wizualizację za pomocą przeciwciał monoklonalnych. Pomaga to określić fenotyp chondrocytów na różnych etapach hodowli.

Ten film demonstruje ilościową technikę punktowej plamy (QDB) do bezwzględnej kwantyfikacji interesujących białek w próbce tkanki. Białka w próbce są unieruchomione na membranie nitrocelulozowej wewnątrz studzienek płytki QDB. Wykorzystując przeciwciała specyficzne dla białka docelowego znakowane enzymem peroksydazy, substrat chemiluminescencyjny jest utleniany w celu wytworzenia światła, które jest mierzone w celu określenia stężenia białka w próbce.

Film demonstruje technikę western blottingu opartą na normalizacji całkowitego białka do ilościowego określania docelowej ekspresji białka w próbce. Wykorzystując całkowite barwienie białka w próbce, przeprowadza się analizę ratiometryczną w celu określenia względnego poziomu ekspresji białka docelowego.

Film opisuje technikę western blottingu jednokomórkowego, która identyfikuje skład pojedynczych komórek uchwyconych na jednokomórkowym chipie western blotting w heterogenicznej zawiesinie. Technika ta wykrywa intensywność fluorescencji fluoroforu przypisanego do markera białkowego specyficznego dla komórki docelowej.

Ten film opisuje oparte na chemiluminescencji western blot immunoprecypitowanych lizatów. Technika ta pomaga określić przetwarzanie i aktywację białek. Wykryty sygnał chemiluminescencyjny jest proporcjonalny do poziomu przetworzenia białka podczas jego aktywacji.

W tym filmie opisujemy technikę Southern blotting w celu identyfikacji homologicznych zdarzeń rekombinacji w genomie embrionalnych komórek macierzystych myszy za pomocą sond znakowanych radioaktywnie. Regiony DNA zawierające zdarzenia rekombinacji homologicznej pojawiają się jako wyraźne prążki, gdy błona zawierająca DNA związane z sondą jest wystawiona na działanie promieni rentgenowskich.

W tym filmie demonstrujemy northern blot, technikę hybrydyzacji do wykrywania i ilościowego oznaczania mikroRNA (miRNA) z całkowitego RNA wyekstrahowanego z tkanki roślinnej.