JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 4:43 min. • July 8th, 2025
Miejsca zapalne zawierają różne komórki odpornościowe, w tym monocyty, makrofagi i leukocyty.
Aby zidentyfikować heterogeniczną populację komórek za pomocą jednokomórkowego western blotting, należy pobrać wstępnie uwodniony chip do bibuły, składający się z fotoaktywowanego żelu poliakrylamidowego uformowanego w bloki. W każdym bloku znajdują się liczne mikrodołki. Tworzenie wzoru w kilku blokach przechwytuje wiele komórek równolegle.
Dodać zawiesinę zawierającą niejednorodną populację komórek. Wymiary studni pozwalają na osiedlanie się pojedynczych komórek. Zanurz chip w komorze elektroforetycznej wypełnionej odpowiednim buforem. Cząsteczki detergentu w buforze rozrywają błonę komórkową, uwalniając zawartość komórkową.
Zastosuj pole elektryczne. Uwolnione białka migrują przez żel, rozdzielając się na pasma o różnej wielkości. Umyj chip buforem myjącym, aby usunąć niespecyficznie związane cząsteczki, pozostawiając tylko białka komórkowe, w tym pożądane białka markerowe.
Wystaw żel na działanie światła UV, aktywując jego powierzchnię i unieruchamiając białka.
Dodaj koktajl przeciwciał pierwszorzędowych, które wiążą się specyficznie z białkami markerowymi charakterystycznymi dla każde
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych