JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 6:43 min. • July 8th, 2025
Interakcje białko-białko (IPP) mają kluczowe znaczenie w regulacji większości procesów biologicznych.
Aby wykryć IPP za pomocą biodetekcji polowej, zacznij od grafenowego układu tranzystora polowego. Chip składa się z funkcjonalizowanej karboksylowo powierzchni grafenu jako półprzewodnikowego kanału między elektrodą źródłową a drenową.
Inkubować chip ze świeżym roztworem karbokodiimidu i N-hydroksysulfosukcynimidu, sulfo-NHS, w buforze obojotwórczym. Bufor ten wytwarza odpowiednie pH, umożliwiając karbodimidowi i sulfo-NHS aktywację funkcjonalizowanych grup karboksylowych chipa, tworząc estry reagujące z aminami.
Dodaj docelowy roztwór białka. Aminy pierwszorzędowe reagują z estrami reaktywnymi aminami, unieruchamiając białka na chipie poprzez tworzenie wiązań amidowych. Dodać roztwór hartowniczy zawierający aminy, aby zablokować niezwiązane estry reagujące z aminami, zapobiegając niespecyficznemu wiązaniu.
Włóż chip do czytnika elektronicznego i skalibruj go za pomocą bufora. Czytnik przykłada stałe napięcie między elektrodami. Mierzy się wynikowy przepływ prądu elektrycznego między elektrodami w stanie niezwiązanym analitu.
Dodać najniższe stężenie analitu. Interakcja między biał
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych