Spektroskopia fluktuacji fluorescencji w celu zbadania interakcji białek w kontaktach komórkowych

Interakcje komórka-komórka - za pośrednictwem białek na sąsiednich powierzchniach komórek - mogą być badane w żywych komórkach za pomocą testu spektroskopii fluktuacji fluorescencji.

Po pierwsze, weź oddzielne hodowle komórkowe z ekspresją receptora adhezyjnego - białka transbłonowego. Receptor w komórkach z obu populacji jest znakowany separowanymi spektralnie białkami fluorescencyjnymi. Te fluorescencyjne znaczniki są obecne w obszarze cytoplazmatycznym receptora, zapobiegając interferencji interakcji komórka-komórka.

Wyrzuć pożywkę i dodaj trypsynę, ułatwiając odrywanie komórek. Wymieszaj dwie populacje komórek i inkubuj, pozwalając receptorom sąsiednich komórek na utworzenie homotypowych interakcji trans.

Umieść komórki pod mikroskopem konfokalnym. Oświetlić próbkę za pomocą źródeł laserowych o odpowiednich długościach fal, powodując emisję z obu etykiet fluorescencyjnych. Zlokalizuj dwie sąsiednie komórki z różnokolorowymi sygnałami fluorescencyjnymi w kontakcie.

Uzyskaj skan liniowy - prostopadły do obszaru błon komórkowych w kontakcie - przy użyciu kanału widmowego obu znaczników fluorescencyjnych. Laser skupia się na niewielkiej objętości próbki — objętości detekcji. Gdy re