JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 6:05 min. • July 8th, 2025
Spektroskopia magnetycznego rezonansu jądrowego (NMR) umożliwia wykrywanie interakcji białko-białko na poziomie atomowym.
Aby zbadać interakcje między białkami globularnymi i spiralnymi, oznacz oczyszczone białka globularne typu dzikiego lub zmutowane za pomocą 15N - izotopu azotu. W probówce NMR wymieszaj znakowane białka kuliste i nieznakowane białka spiralne w rozpuszczalniku zawierającym wzorzec NMR. Włóż probówkę do spektrometru NMR.
Magnesy spektrometru generują silne pole magnetyczne, ustawiając 15znakowanych N kulistych jąder białek równolegle do pola. Impuls o częstotliwości radiowej lub RF wzbudza 15jąder N, aby ustawiły się antyrównolegle do pola.
Częstotliwość impulsów wymagana do przejścia 15jąder N między tymi dwoma stanami określa częstotliwość rezonansową. Normalizacja częstotliwości rezonansu 15N do wzorca NMR mierzy przesunięcie chemiczne 15N.
Pole magnetyczne jest dostosowane do ustawiania 1jąder H - związanych z 15N - równolegle do pola. Impulsy RF są regulowane i rejestrowane jest przesunięcie chemiczne o 1H.
Podczas oddziaływań białkowych zmienia się środowisko chemiczne otaczające oddziałujące reszty aminokwasowe, zmieniając wiązania chemiczne 15 N-1H i odpow
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych