JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 5:22 min. • July 8th, 2025
Rozpocznij wyświetlanie fagów od dodania biblioteki fagów do studzienek płytki wielodołkowej, pokrytej białkiem docelowym. Biblioteka fagów zawiera genetycznie zmodyfikowane fagi, z których każdy wyświetla indywidualny wariant białka połączony z białkiem płaszcza na swojej powierzchni. Inkubuj, umożliwiając interakcję faga i białek docelowych.
Fagi z białkami o wysokim powinowactwie do białek docelowych wiążą się z białkiem docelowym. Przemyć buforem, usuwając niezwiązane fagi. Dodaj kwaśny roztwór, zakłócając interakcje faga i białka docelowego, uwalniając fagi do roztworu. Zneutralizować pH roztworu za pomocą buforu, utrzymując stabilność faga.
Przenieś fagi do świeżej probówki. Inkubować z roztworem blokującym zawierającym białka, zapobiegając niespecyficznym interakcjom.
Przenieś fagi do aktywnie dzielącej się zawiesiny E. coli, infekując bakterie i inicjując cykl replikacji faga. Suplement z fagami pomocniczymi, które infekują bakterie, dostarczając białek okrywy niezbędnych do pakowania fagów potomnych. Przenieść zawiesinę do selektywnej pożywki, umożliwiając wzrost bakterii zakażonych fagami.
Fagi potomne są w końcu uwalniane do pożywki. Wirówka. Zebrać supernatant zawierają
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych