JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 4:31 min. • July 8th, 2025
Białka regulatorowe, takie jak czynniki transkrypcyjne, rozpoznają i wiążą się z określonymi sekwencjami DNA w regionach promotorowych, regulując ekspresję genów.
Aby wykryć specyficzne interakcje czynnik transkrypcyjny-DNA za pomocą testu przesunięcia ruchliwości elektroforetycznej, należy rozpocząć od rurki zawierającej pożądany czynnik transkrypcyjny i specyficzne krótkie, znakowane barwnikiem fluorescencyjnym sondy DNA w podczerwieni w buforze wiążącym. Inkubuj w ciemności, zapobiegając fotowybielaniu barwnika.
Siła jonowa i pH buforu zapewniają odpowiednie warunki dla czynnika transkrypcyjnego do identyfikacji i wiązania określonych sekwencji wiążących na sondzie DNA. Jony magnezu w buforze dodatkowo stabilizują kompleksy białko-DNA.
Dodaj odpowiedni barwnik ładujący do mieszanki, pomagając zobrazować postęp elektroforezy. Załaduj tę mieszaninę i sondy DNA do studzienek prefabrykowanego, niedenaturującego żelu poliakrylamidowego.
Wykonaj elektroforezę w ciemności.
Przyłożone pole elektryczne powoduje, że niezwiązane, ujemnie naładowane sondy DNA o niskiej masie cząsteczkowej przemieszczają się przez żel w kierunku dodatnio naładowanych anod. Jednak duże kompleksy białko-sonda
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych