JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 7:05 min. • July 8th, 2025
Aby zidentyfikować miejsca wiązania białka docelowego na DNA, należy rozpocząć od komórek prekursorowych oligodendrocytów zawierających białko docelowe usieciowane ze specyficznymi sekwencjami DNA w chromatynie.
Potraktuj komórki buforem do lizy zawierającym inhibitory proteazy. Bufor do lizy komórek ulega lizie, podczas gdy inhibitory dezaktywują proteazy, aby zachować integralność kompleksów białko-chromatyna.
Sonikować zawartość, aby ścinać kompleksy na mniejsze fragmenty chromatyny, przy czym niektóre z nich zachowują białko docelowe.
Odwirować w celu osadzenia składników komórkowych i przenieść supernatant zawierający fragmenty chromatyny do świeżej probówki. Inkubować z przeciwciałami anty-docelowymi, które specyficznie wiążą się z białkiem docelowym na fragmentach chromatyny.
Uzupełnij probówkę kulkami magnetycznymi pokrytymi białkiem A, które wiążą się z regionem Fc wstępnie związanych przeciwciał. Zastosuj pole magnetyczne, aby selektywnie wytrącić białka docelowe związane z przeciwciałami skompleksowane z fragmentami chromatyny.
Potraktuj kompleksy kulek buforem elucyjnym o wysokiej zawartości soli, aby zakłócić interakcje białko-chromatyna i uwolnić nagie DNA bez powiąza
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych