JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 4:25 min. • July 8th, 2025
Białka wiążące RNA, RBP, działają jako regulatory potranskrypcyjne, wiążąc się z regionem inicjacji translacji, TIR, mRNA i hamując translację.
Aby zbadać interakcje RNA-RBP poprzez translacyjną represję genu reporterowego, weź hodowlę komórek bakteryjnych zawierającą dwa plazmidy - miejsce wiązania i plazmidy RBP.
Plazmid w miejscu wiązania koduje fluorescencyjny gen reporterowy. Po transkrypcji powstały TIR mRNA zawiera miejsce wiązania rybosomów i strukturę spinki do włosów, z sekwencją rozpoznawaną przez RBP.
Rybosomy wiążą się z miejscem wiązania na mRNA i destabilizują strukturę spinki do włosów, prowadząc do translacji mRNA i tworzenia fluorescencyjnych białek reporterowych. Plazmid RBP wyraża chimeryczny RBP połączony z innym białkiem fluorescencyjnym. Indukowalny promotor kontroluje chimeryczną ekspresję białka.
Dodaj induktor, który aktywuje czynnik transkrypcyjny, który wiąże się z promotorem, indukując ekspresję białka chimerycznego. RBP białka chimerycznego wiąże się ze strukturą spinki do włosów. Blokuje to wiązanie rybosomu z mRNA, hamując translację białka reporterowego.
Wraz ze wzrostem stężenia induktora zwiększa się produkcja RBP, co skutkuje silniejszym konkuren
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych