JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 2:43 min. • July 8th, 2025
Interakcje białkowo-fosfolipidowe na błonie komórkowej mają kluczowe znaczenie dla regulacji kilku procesów komórkowych.
Aby wykryć docelowe interakcje białko-fosfolipid in vitro za pomocą ilościowej cytometrii przepływowej, należy pobrać probówkę zawierającą pożądane stężenie pęcherzyków fosfolipidowych o wielkości mikronów, znakowanych lipofilowym barwnikiem - w buforze.
Dodać odpowiednie stężenie różnych znakowanych fluorescencyjnie białek docelowych w roztworze.
Wstrzyknąć zawiesinę do cytometru przepływowego. Ustaw parametry systemu fluidics na niskie natężenie przepływu, aby zapewnić wystarczająco dużo czasu na interakcje białko-fosfolipid.
Gdy znakowane fluorescencyjnie białka i pęcherzyki fosfolipidowe oddziałują w kanale przepływowym, stężenie białek związanych z pęcherzykami wzrasta.
Gdy kompleksy te przechodzą przez wiązki laserowe ze specyficznych kanałów fluorescencyjnych zapewniających odpowiednie długości fal, ulegają wzbudzeniu. Te wzbudzone białka i pęcherzyki fosfolipidowe w kompleksie emitują odpowiednie sygnały fluorescencyjne po relaksacji do stanu podstawowego, które są wychwytywane przez odpowiednie detektory.
Wykrycie wysokiej średniej intensywności fluoresc
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych