Obrazowanie pojedynczych cząsteczek w celu wizualizacji łączenia kondensatów białek fuzyjnych na zasłonach DNA

Chimeryczne onkogenne białko fuzyjne zawiera N-końcową domenę o niskiej złożoności, LCD, białka wiążącego RNA połączonego z domeną wiążącą DNA, DBD, białka czynnika transkrypcyjnego. Białka te tworzą kondensat białkowy, który rekrutuje polimerazę RNA-II i napędza onkogenezę.

Aby zobrazować składanie się kondensatów białkowych za pomocą obrazowania pojedynczych cząsteczek, zacznij od komórki przepływowej DNA ― szkiełka ze stopionego szkła krzemionkowego wyposażonego w wlotowe i wylotowe porty iniekcyjne. Powierzchnia komory przepływowej jest pokryta biotynylowaną dwuwarstwą lipidową w celu ochrony powierzchni i wykonana z bariery zygzakowatej.

Podłącz go do systemu mikroprzepływowego. Wprowadzić roztwór streptawidyny, który wiąże się ze swoim ligandem o wysokim powinowactwie, biotyną, na warstwie lipidowej. Wstrzyknąć dwuniciowe DNA lambda znakowane biotyną, które zawiera wiele powtórzeń sekwencji wiążących białka fuzyjne. Streptawidyna dwuwarstwy lipidowej wiąże się z biotyną DNA i przyłącza DNA lambda do dwuwarstwy.

Przepłukać odpowiednim buforem. Siła hydrodynamiczna jego przepływu prostuje zakotwiczone cząsteczki DNA, pozwalając im zwisać jako zasłony DNA nad barierami.

Umieść k