Test modulacji pH na podpartych dwuwarstwach lipidowych w celu wykrycia interakcji białko-fosfoinozytyd

4,5-bisfosforan fosfatydyloinozytolu lub PIP2 jest niewielkim fosfolipidem związanym z błoną. Fosfolipaza C lub PLC, ze specyficznymi domenami wiążącymi PIP2, wiąże się z PIP2, generując wtórne przekaźniki niezbędne dla kilku procesów komórkowych.

Aby wykryć interakcje PLC-PIP2 in vitro, należy rozpocząć od małego pęcherzyka jednowarstwowego, SUV, kwaśnej zawiesiny, składającej się z mieszaniny PIP2 i fosfolipidów, z których jeden jest sprzężony z barwnikiem fluorescencyjnym wrażliwym na pH.

Odpipetować roztwór do wstępnie zmontowanego, spreparowanego urządzenia mikroprzepływowego na wlocie i podłączyć rurkę wylotową. Przenieś i zabezpiecz urządzenie na stoliku mikroskopu fluorescencyjnego. Poprzez grawitację SUV-y przechodzą przez dno mikrokanału, wykonane z hydrofilowego szkła nakrywkowego.

SUV-y adsorbują się na powierzchni szkła, a pH roztworu zmniejsza odpychanie elektrostatyczne między nimi. SUV-y oddziałują z powierzchnią, odkształcając się i stapiając, tworząc duże pęcherzyki.

Po krytycznym pokryciu powierzchni pęcherzyki pękają spontanicznie, tworząc podpartą dwuwarstwę lipidową, SLB. Przepuść bufor przez kanał, usuwając niezaabsorbowane pęcherzyki.

Korzystając z odpowiedn