JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 4:19 min. • July 8th, 2025
Oligomer białkowy to kompleks wielu podjednostek białkowych, które są ze sobą połączone, tworząc większą jednostkę funkcjonalną.
Aby określić masę cząsteczkową monomerów białkowych i ich oligomerów w roztworze za pomocą SEC-MALS, kombinacji chromatografii wykluczania wielkości i wielokątowego rozpraszania światła, należy rozpocząć od chromatografii wykluczania wielkości lub kolumny SEC.
Kolumna zawiera porowate, przypominające sito, kuliste kulki żelowe, które zatrzymują w sobie cząsteczki o mniejszych rozmiarach. Zrównoważyć kolumnę buforem zgodnym ze stanem natywnym białka.
Umieścić próbkę zawierającą monomery i oligomery białkowe na górze kolumny.
Podczas przepływu oligomery przechodzą przez przestrzeń międzycząsteczkową kolumny, podczas gdy monomery zostają uwięzione w porach kulek. Powoduje to, że oligomery białkowe o większych rozmiarach przemieszczają się szybciej niż monomery o mniejszych rozmiarach.
Szybko eluujące się oligomery, a następnie wolno uwalniające się monomery, należy skierować do detektora MALS.
Gdy przechodzą przez detektor, oświetla je światło laserowe, które jest rozpraszane pod różnymi kątami. Oligomery wielopodjednostkowe rozpraszają więcej światła niż mo
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych