JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 6:27 min. • July 8th, 2025
Test wiązania konkurencyjnego identyfikuje małe cząsteczki, które zakłócają interakcje receptor-ligand poprzez konkurencyjne wiązanie z receptorem docelowym, hamując naturalne wiązanie ligandów.
Aby zidentyfikować interakcje receptora z jego naturalnym ligandem w obecności specyficznego dla receptora antagonisty małych cząsteczek, należy rozpocząć od zawieszenia ludzkich komórek limfocytów T wyrażających receptor docelowy.
Dodać zawiesinę komórkową do studzienek płytki wielodołkowej zawierającej rosnące stężenia antagonistów. Inkubować. Antagonista wiąże się z ortosterycznym miejscem wiązania - naturalnym miejscem wiązania ligandu receptora.
Dodaj do studzienek stałe stężenie znakowanych fluorescencyjnie naturalnych ligandów. Inkubować.
Przy niskich stężeniach antagoniści zajmują niewiele ortosterycznych miejsc wiązania, umożliwiając naturalne wiązanie ligandów z receptorami. Jednak przy wyższych stężeniach antagoniści zajmują większość ortosterycznych miejsc wiązania, umożliwiając minimalne naturalne wiązanie ligand-receptor
.Odwirować do granulowania komórek. Odrzucić supernatant. Ponownie zawieś komórki w paraformaldehydzie, aby je utrwalić, zachowując morfologię komórkową.
Za p
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych