JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 3:35 min. • July 8th, 2025
Aby zbadać interakcje receptor-ligand, należy rozpocząć od płytki wielodołkowej zawierającej pożywkę z komórkami docelowymi eksprymującymi ligandy testowe na swojej powierzchni.
Dodaj zmodyfikowane mysie komórki BW - nową populację komórek B wyrażających receptory chimeryczne związane z błoną. Receptory chimeryczne obejmują specyficzną domenę zewnątrzkomórkową receptora połączoną z transbłonową i wewnątrzkomórkową domeną sygnalizacyjną receptora komórek B.
Ligandy na komórkach docelowych oddziałują z zewnątrzkomórkową domeną chimerycznych receptorów komórek BW, powodując wewnątrzkomórkową aktywację domeny sygnalizacyjnej w komórkach BW. To wyzwala dalszą sygnalizację i produkcję cytokin - wydzielniczych cząsteczek reporterowych, które są uwalniane na zewnątrz komórek BW, pojawiając się w pożywce.
Odwirować płytkę. Przenieść supernatant zawierający cytokiny na płytkę ELISA wstępnie pokrytą przeciwciałami antycytokinowymi. Cytokiny oddziałują z regionami Fab przeciwciał, prowadząc do ich unieruchomienia na powierzchni płytki.
Potraktuj płytkę roztworem blokującym, aby zablokować niespecyficzne miejsca wiązania. Dodaj biotynylowane przeciwciała antycytokinowe, które oddziałują z wstęp
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych