Sonda wymuszająca biomembranę do ilościowego określania interakcji receptor-ligand

Interakcja między receptorem limfocytów T, TCR, a peptydem antygenowym prezentowanym przez MHC lub główny kompleks zgodności tkankowej na komórce prezentującej antygen, APC, powoduje, że komórka T wywiera siłę mechaniczną na APC. Zjawisko to jest niezbędne do aktywacji limfocytów T.

Aby określić ilościowo interakcje receptor-ligand za pomocą sondy siły biomembrany, BFP, zacznij od niestandardowej komory komórkowej opartej na szkiełku. Umieść komorę komórkową pod mikroskopem.

Wstrzyknąć do komory zawiesiny biotynylowanych, spuchniętych erytrocytów, szklane kulki sondy pokryte związanymi z peptydami kompleksami MHC-streptawidyna-biotyna i limfocyty T. Umieść mikropipety wypełnione buforem buforowym sondy, tarczy i pomocnika wokół komory.

Odessać biotynylowane erytrocyty za pomocą pipety z sondą, umieszczając ją w pustym miejscu. Zassać komórkę T za pomocą docelowej mikropipety, umieszczając ją po prawej stronie RBC. Odessać kulkę sondy za pomocą mikropipety pomocniczej i przymocować ją do wierzchołka RBC. Streptawidyna zawarta w kulce wiąże się z biotyną RBC i tworzy sondę siły.

Dopasuj limfocyt T do sondy siły, aby umożliwić TCR interakcję ze swoim ligandem - peptydem związanym z MH