JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 6:56 min. • July 8th, 2025
Zwój korzenia grzbietowego lub DRG to skupisko komórek nerwowych wzdłuż rdzenia kręgowego, które przenoszą informacje czuciowe z obwodowego do ośrodkowego układu nerwowego. Uszkodzenie nerwów obwodowych powoduje akumulację makrofagów w DRG i rozwój bólu neuropatycznego.
Aby wyizolować żywotne makrofagi metodą bezenzymatyczną, należy wziąć świeżo wypreparowaną tkankę DRG myszy w homogenizatorze wypełnionym lodowatym buforem, aby ograniczyć stres komórkowy. Za pomocą tłuczka mechanicznie zhomogenizuj tkankę, aby uwolnić komórki.
Przefiltrować przez sitko komórkowe w celu usunięcia grudek komórek i uzyskania zawiesiny jednokomórkowej w przepływie. Homogenat tkankowy zawiera neurony i komórki nieneuronalne, do których należą makrofagi i swobodnie unosząca się mielina - osłonka izolacyjna neuronów.
Dodać przefiltrowany homogenat do probówki zawierającej pożywkę o gradiencie gęstości i odwirować. Pod wpływem siły odśrodkowej żywotne komórki o większej gęstości wyporu osiadają na dnie rurki, tworząc osad, podczas gdy mielina pozostaje zawieszona. Odrzucić supernatant.
Ponownie zawiesić komórki w buforze zawierającym przeciwciała sprzężone z fluoroforem przeciwko specyficznym dla makrofagó
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych