Izolacja limfocytów z mysiego plastra Peyera

Plastry Peyera, PP, agregaty zorganizowanych tkanek limfatycznych w ścianie jelita cienkiego, zawierają komórki odpornościowe, w tym limfocyty B, limfocyty T, komórki dendrytyczne i makrofagi.

Aby wyizolować limfocyty z mysich PP, zacznij od myszy poddanej eutanazji. Naciąć ścianę brzucha, odsłaniając jamę otrzewnej. Zlokalizuj jelito ślepe. Wypreparuj połączenie krętniczo-kątnicze, aby oddzielić jelito ślepe od jelita cienkiego.

Wyciąć krezkę i naciąć jelito cienkie w dwunastnicy, aby usunąć jelito cienkie z jamy otrzewnej. Umieść jelito cienkie w wielodołkowej płytce zawierającej schłodzone podłoże i spłucz w celu usunięcia zanieczyszczeń.

Ułóż jelito cienkie stroną krezkową skierowaną w dół i zwilż pożywką, aby utrzymać nawodnienie tkanek. Zidentyfikuj PP — białe wielopłatkowe agregaty po stronie przeciwkrezkowej ściany jelita.

Ostrożnie wyciąć PPs, wykluczając otaczającą tkankę jelitową. Przenieść do probówki zawierającej podłoże. Wysiadywać w ciągłym mieszaniu. Ten etap mieszania odrywa śluz, resztki komórek i wszelkie kał od PP, poprawiając w ten sposób regenerację limfocytów PP.

Następnie przenieś tkankę do sitka komórkowego o odpowiednim rozmiarze oczek. Delikatnie rozerwij