JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 2:45 min. • July 8th, 2025
Komórki jednojądrzaste krwi obwodowej, PBMC, składają się z niejednorodnej populacji wyspecjalizowanych komórek odpornościowych, w tym limfocytów, monocytów i komórek dendrytycznych.
Aby wyizolować PBMC, należy rozpocząć od probówki zawierającej świeżo uzyskaną ludzką krew kożuchówki. Krew kożucha zawiera PBMC wraz z granulocytami z wielopłatkowymi jądrami, erytrocytami i płytkami krwi zawieszonymi w osoczu.
Ostrożnie nałożyć zawiesinę kożucha na równą objętość podłoża o gradiencie gęstości o pożądanej gęstości właściwej, która jest optymalna do separacji PBMC.
Podczas wirowania różne typy komórek rozdzielają się na odrębne warstwy, w oparciu o gęstość komórek w stosunku do podłoża gradientowego. Dodatkowo polisacharydy w pożywce o gradiencie gęstości sprzyjają agregacji erytrocytów i sedymentacji.
Erytrocyty i granulocyty o większej gęstości osadzają się na dnie probówki, podczas gdy osocze o najmniejszej gęstości tworzy najwyższą warstwę. PBMC, które mają niższą gęstość niż ośrodek gradientu gęstości, tworzą mętną białą warstwę na granicy faz ośrodka gradientu gęstości plazmy.
Usuń górną warstwę plazmy. Ostrożnie zebrać mętną warstwę zawierającą PBMC i przenieść ją do świeżej pro
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych