JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:58 min. • July 8th, 2025
Aby przeprowadzić immunomagnetyczną ujemną separację komórek B, zbierz ludzką krew obwodową do probówki zawierającej antykoagulant, aby zapobiec krzepnięciu krwi. Dodaj czerwone krwinki, RBC, bufor do lizy, aby lizować krwinki czerwone bez wpływu na inne komórki krwi.
Odwirować w celu osadzenia nienaruszonych, gęstszych komórek krwi z mniej gęstych zlizowanych krwinek czerwonych, które pozostają w supernatancie. Odrzucić supernatant. Zawiesić osad w świeżym podłożu.
Przenieś komórki na płytkę hodowlaną. Inkubować, aby makrofagi i monocyty przylegały do płytki, podczas gdy nieprzylegające komórki, w tym limfocyty B, pozostają w zawiesinie.
Zebrać komórki w zawiesinie do świeżej probówki. Odwirować w celu osadzenia komórek i ponownego ich zawieszenia w buforze.
Dodać roztwór koktajlowy zawierający biotynylowane przeciwciała specyficzne dla komórek krwi innych niż limfocyty B. Przeciwciała wiążą się z antygenami na powierzchni komórek innych niż B, pozostawiając limfocyty B nieznakowane.
wirówka. Odrzucić supernatant zawierający niezwiązane przeciwciała.
Dodać roztwór kulek magnetycznych sprzężonych ze streptawidyną. Podczas inkubacji streptawidyna na mikrogranulkach ściśle wiąże się
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych