JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:20 min. • July 8th, 2025
Limfocyty B wydzielające przeciwciała lub ASC to zróżnicowane limfocyty B, które wydzielają izotypy przeciwciał, w tym IgG i IgM, w celu zapewnienia ochrony przed patogenami.
Aby przeprowadzić ocenę funkcjonalną ASC in vitro, należy rozpocząć od testu punktowego immunoenzymu. Weź płytkę ELISpot zawierającą u podstawy aktywowaną membranę z polifluorku winylidenu.
Inkubować studzienki z fragmentami przeciwciał poliklonalnych zawierającymi wyłącznie regiony Fab bez regionu Fc przeciwciała. Każdy region Fab ma miejsce wiązania dla określonych izotypów przeciwciał — IgG lub IgM, co umożliwia identyfikację obu izotypów.
Podczas inkubacji fragmenty przeciwciał przyczepiają się do błony, co prowadzi do unieruchomienia.
Załóż studzienki roztworami blokującymi, aby zapobiec niespecyficznemu wiązaniu. Wysiewaj płytkę aktywowanymi komórkami B wydzielającymi przeciwciała i inkubuj. ASC wydzielają różne izotypy, w tym IgG i IgM, które wiążą się z fragmentami przeciwciał związanymi z błoną.
Przemyć płytkę buforem w celu usunięcia niezwiązanych wydzielanych przeciwciał. Potraktuj niektóre studzienki sprzężonymi z enzymami przeciwciałami wykrywającymi IgM, a inne przeciwciałami wykrywającymi IgG i
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych